Berezka7km.ru

Березка 7км
0 просмотров
Рейтинг статьи
1 звезда2 звезды3 звезды4 звезды5 звезд
Загрузка...

Счетчик гематологический форменных элементов крови

Счетчик гематологический форменных элементов крови

Унифицированный метод автоматического подсчета эритроцитов с помощью счетчика форменных элементов облегчает выполнение этого исследования и делает его более производительным. Отечественный гематологический комплекс КГ-2, а также многочисленные зарубежные образцы—«Пикоскел» (ВНР), «Tur» (ГДР), «Celloscope» (Швеция), «Cell-Counter» (ФРГ), СС-1006 (Япония) и др.— предусматривают в своей программе подсчет количества эритроцитов в крови.

Помимо счетчиков форменных элементов, подсчет эритроцитов включен в программу всех существующих гематологических автоматов: «SMA-7a», «Гемалог-8» фирмы «Technicon» (США), «Coulter Counter S» фирмы «Coultronics France SA» (Франция) и др.

При использовании счетчиков разведение крови (подготовка пробы для подсчета) осуществляется вручную. При использовании гематологических автоматов отбор пробы крови и ее разведение происходят автоматически.

Принцип работы.

Принцип работы большинства счетчиков основан на кондуктометрическом методе. Определенное количество разведенной изотоническим раствором натрия хлорида или другим электролитом крови пропускают через микроотверстие. Проходящая клетка увеличивает сопротивление между электродами, возникающий импульс передается на счетное устройство с цифровой индикацией.

Ход исследования.

Cоответствует инструкции, приложенной к прибору.

Нормальные величины.

Количество эритроцитов в крови, по данным В. В. Соколова, а также И. А. Грибовой (1979), составляет 4*10 6 —5,1*10 6 в 1 мкл (4*10 12 /л—5,1*10 12 /л) у мужчин и 3,7*10 6 —4,7*10 6 в 1 мкл (или 3.7*10 12 /л — 4,7*10 12 /л) у женщин.

Клиническое значение.

Снижение числа эритроцитов в крови является одним из основных лабораторных критериев анемии. Однако степень эритроцитопении широко варьирует при разных формах малокровия. Так, при наиболее распространенном заболевании — железодефицитной анемии на почве хронических кровопотерь — количество эритроцитов может быть нормальньнч или нерезко сниженным (3*10 6 — 3,6*10 6 в 1 мкл, или 3*10 12 /л—З.б*10 12 /л).

При острой кровопотере, B12-дефицитной анемии (в стадии рецидива), гипопластической анемии, гемолитических анемиях (в период криза) число эритроцитов в крови может значительно снизиться и достигнуть 1*10 6 в 1 мкл, или 1*10 12 /л и менее.

Повышение количества эритроцитов в крови — эритроцитоз — может быть обусловлен многими причинами. Значительный эритроцитоз (6,5*10 6 —8,5*10 6 в 1 мкл, или б*10 12 /л— 8,5*10 12 /л крови) является одним из важных лабораторных симптомов эритремии. Другие гемобластозы миелопролиферативной природы (сублейкемический миелоз или миелофиброз и хронический миелолейкоз) реже сопровождаются эритроцитозом и только в начальной стадии заболевания.

Вторичный (симптоматический) эритроцитоз может сопутствовать широкому кругу различных заболеваний и бывает абсолютным (связанный с усилением нормального эритропоэза) и относительным (гемоконцентрационный). Абсолютные эритроцитозы сопутствуют хроническим обструктивным заболеваниям легких, врожденным порокам сердца, первичной легочной гипертензии, синдрому Пиквика, наследственным гемоглобинопатиям, гипернефроидному раку, гемангиобластоме мозжечка, гепатоме, гормонально-активным опухолям, заболеваниям, сопровождающимся стенозом почечных артерий, заболеваниям ЦНС и др. Вторичные относительные эритроцитозы связаны с нарушением гемоконцентрации и характеризуются нормальным объемом циркулирующих эритроцитов при снижении массы циркулирующей крови и массы циркулирующей плазмы.

Литература.

Грибова И. А. Гематологическая норма.— В кн.: Руководство по гематологии / Под ред. А. И. Воробьева, Ю. И. Лорие. М.: Медицина, 1979, с. 53.

Подсчет тромбоцитов по Фонио

Пробирки с кровью

Общий анализ крови позволяет получить ценную диагностическую информацию. Часто в лабораториях используют автоматические гематологические счетчики, позволяющие оценить количество лейкоцитов, эритроцитов, тромбоцитов и некоторых других форменных элементов крови. Несмотря на удобство проведения автоматического подсчета, наиболее информативными считаются методы микроскопического исследования. Один из них – тромбоциты по Фонио.

Что такое тромбоциты

Тромбоцитами называют безъядерные клетки крови, которые синтезируются тканями красного костного мозга. Цикл их жизнедеятельности составляет около 7 суток, после чего они утилизируются в печени и селезенке. У тромбоцитов процесс старения выражен более, чем у других форменных элементов крови.

Как и другие составляющие крови, тромбоциты делятся на молодые, зрелые и старые. У здорового человека количество зрелых клеток не должно превышать 95%. Если при анализе обнаруживается большая концентрация молодых телец, это свидетельствует о развитии некоторых заболеваний, среди которых можно назвать многочисленные повреждения кровеносных сосудов и прочее. Кроме молодых, в плазме крови нередко обнаруживаются старые тромбоциты. Такое явление говорит о нарушении процесса производства и утилизации клеток.

Роль в организме

Тромбоциты принимают активное участие в процессах, связанных с образованием тромбов. Они также производят специальное вещество, необходимое для регенерации тканей, стимуляции деления клеток, регулировки уровня проницаемости клеточных мембран и поддержания эластичности сосудов.

Ценное значение количественный и качественный состав тромбоцитов имеет при диагностике заболеваний сердца и сосудов. Высокое количество этих телец называется тромбоцитозом, пониженное – тромбоцитопенией.

В чем заключается метод Фонио

Подсчет тромбоцитов по Фонио – это анализ, помогающий выявить точное количество этих телец в крови, диагностировать многие заболевания у человека. При этом подсчет тромбоцитов осуществляется в мазке крови на тысячу эритроцитов, после чего это число пересчитывается в соотношении на 1 микролитр или литр. Методика считается очень точной, применяется для диагностики многих патологий.

кровь окрашивается по методу Романовского-Гимзе

Во время анализа кровь окрашивается по методу Романовского-Гимзе

Для проведения анализа кровь берется из пальца. Общее количество тромбоцитов в единице крови называется коагулограммой. Этот вид исследования назначают каждому пациенту, ведь анализ помогает заподозрить и выявить многие болезни.

Подготовка к анализу

На результат анализа тромбоцитов по Фонио могут повлиять некоторые факторы. В связи с этим необходимо правильно подготовиться к сдаче крови. Пациенту накануне перед забором биологического материала следует учесть следующие рекомендации:

  • сдача крови должна проводиться через 8 часов после последнего приема пищи, так как многие продукты способны повлиять на цветовой показатель форменных элементов крови;
  • накануне перед анализом нельзя заниматься спортом. Если человек выполнял любые физические нагрузки, результат исследования может быть неточным;
  • забор материала осуществляется в утреннее время;
  • наиболее точную информацию можно получить при сдаче крови повторно. Это помогает проследить за концентрацией тромбоцитов в динамике.

Кроме этого, врачу следует обязательно сообщить, принимались ли до этого какие-либо медикаментозные средства. Многие лекарства также способны исказить результат.

Подсчет тромбоцитов по Фонио

При подсчете тромбоцитов лаборант применяет несколько видов реактивов. Это этилендиаминтетраацетат натрия или сульфат магния. Реактивы берутся с помощью пипетки СЕЭ-метра.

Анализ проводится в несколько этапов:

  1. В пробирку добавляют один из реактивов и кровь с помощью пипетки. Количество реактива берется до отметки 75, объем крови – до отметки К.
  2. Полученную массу хорошо перемешивают и используют для изготовления мазков.
  3. Если применяется магния сульфат, мазок окрашивается по методу Романовского-Гимзе на протяжении 120 минут и 45 минут, если лаборант берет этилендиаминтетраацетат натрия. При этом тромбоциты окрашиваются в фиолетово-розовый цвет.
Читайте так же:
Многотарифный счетчик как сэкономить

Микроскоп

Подсчет тромбоцитов проводят через микроскоп

С помощью микроскопа производится подсчет тромбоцитов и эритроцитов до тысячи красных телец крови. Чтобы узнать количество тромбоцитов, их умножают на число эритроцитов в 1 микролитре, после чего делят полученную цифру на тысячу. Получить наиболее достоверные результаты помогает специфический окрас исследуемых клеток. Именно поэтому многие специалисты при постановке диагноза используют метод подсчета тромбоцитов по Фонио.

Преимущества методики

Способ подсчета эритроцитов по Фонио успешно применяется многими врачами на протяжении многих лет. Техника имеет ряд преимуществ, среди которых выделяют:

  • при рассмотрении крови под микроскопом лаборант четко видит исследуемый материал, цвет, форму, число клеток;
  • при необходимости анализ можно проводить в любое время суток;
  • метод прост в использовании, что связано с простой формулой, но в то же время очень информативен.

О чем могут свидетельствовать низкие показатели

Тромбоцитопения или пониженная концентрация эритроцитов в крови у человека свидетельствует о развитии различных нежелательных состояний. К наиболее частым причинам низких показателей относят:

  • радиационное облучение больного;
  • воздействие на организм свинца и прочих вредных веществ;
  • патологии системы кроветворения;
  • коллагенозы у пациента (совокупность заболеваний, касающихся соединительной ткани);
  • наследственную предрасположенность;
  • хронический нефрит.

У больных с тромбоцитопенией наблюдаются такие клинические проявления, как частые носовые кровотечения, кровоточивость десен, подкожные геморрагии. У женщин заболевание проявляется в виде обильных и длительных месячных.

Носовое кровотечение

Тромбоцитопения вызывает склонность к кровоточивости

Лечение такого состояния подразумевает устранение основной причины, повлекшей за собой нарушение. При этом используется терапия с помощью медикаментозных средств. В особо тяжелых случаях проводится удаление селезенки или трансплантация костного мозга.

Причины повышенных показателей

При повышении числа рассматриваемых клеток на единицу крови речь идет о тромбоцитозе. Как правило, это вторичная патология, возникающая на фоне следующих состояний:

  • лечение с помощью некоторых медикаментов;
  • перенесенное оперативное вмешательство;
  • удаление селезенки;
  • обильные кровопотери;
  • воспаление оболочки головного мозга;
  • патологии почек и печени;
  • развитие онкологических образований;
  • железодефицитная анемия.

Норма клеток у различных групп населения

При проведении анализа по методу Фонио используется норма от 120 до 400 тыс. клеток в кубическом миллиметре исследуемого материала. Колебание границ зависит от возраста пациента и его половой принадлежности. У женщин, мужчин и детей отклонения в пределах этих границ считаются нормой.

  • дети до года – от 100 до 420 тыс. на мм 3 ;
  • дети от года – от 180 до 320 тыс. на мм 3 ;
  • мужчины – от 180 до 400 тыс. на мм 3 ;
  • женщины от 180 до 340 тыс. на мм 3 .

У подростков уровень тромбоцитов может снижаться до 70 тыс. на мм3. У мужчин максимальное количество этих телец отмечается в возрасте 40 лет. Такие отклонения обязательно учитываются при постановке диагноза, объясняются физиологическими и возрастными особенностями организма.

Что влияет на уровень тромбоцитов в крови

Уменьшение или рост рассматриваемых клеток не всегда свидетельствует о развитии какой-либо патологии. Иногда уровень этих телец колеблется вследствие интенсивных и регулярных физических нагрузок, при неправильном питании. Многим людям может показаться странным тот факт, что при потере крови уровень тромбоцитов возрастает. Это объясняется попыткой организма компенсировать потерю крови повышенной выработкой ее форменных элементов.

Усталость у мужчины

Стрессы и вредные привычки могут повлиять на уровень тромбоцитов в крови

Часто показатели повышены у людей, употребляющих алкоголь на протяжении длительного времени. Нарушается норма тромбоцитов во время приема медикаментов с тромбоцитопеническим действием. Повлиять на результаты анализа может даже безобидное кровотечение из носа.

Методы нормализации показателей

Первое, что нужно сделать при обнаружении повышенных или пониженных показателей тромбоцитов в крови, это провести дальнейшее обследование пациента с целью выявления патологии, повлекшей за собой такое состояние. Главный метод терапии тромбоцитопении и тромбоцитоза – борьба с первопричиной. Если же нарушение развивается по безобидным причинам, повысить количество тромбоцитов можно с помощью таких способов:

  • отказаться от вредных продуктов, исключить из рациона алкогольные напитки, красный виноград, зеленый чай, чернику, томаты;
  • включить в ежедневный рацион яблоки, гречневую кашу, рыбные блюда, болгарский перец, печень;
  • по назначению специалиста принимаются специальные медикаментозные средства;
  • повысить количество клеток помогут витамины группы А, В и С.

Понизить концентрацию рассматриваемых элементов крови поможет отказ от экстремальных видов спорта, адекватная оценка стрессовых ситуаций, избегание конфликтов дома и на работе.

Для снижения тромбоцитов специалисты рекомендуют выполнять следующие правила:

  • принимать ацетилсалициловую кислоту в соответствии с назначением лечащего врача;
  • исключить из питания шиповник, гранат, манго и другие блюда, которые повышают уровень тромбоцитов;
  • пить препараты магния курсами несколько раз в год;
  • употреблять не менее полутора литров воды в сутки.

Подсчет тромбоцитов по методу Фонио – это один из наиболее точных методов исследования крови. С помощью такого анализа врач может выяснить многие патологии, подобрать соответствующее лечение для пациента. Проводится этот анализ также с профилактической целью, что необходимо для ранней диагностики заболеваний и недопущения развития серьезных последствий на их фоне.

Подсчет форменных элементов крови

Количество эритроцитов и лейкоцитов подсчитывают в 1 мм 3 крови, число кровяных пластинок — на тысячу эритроцитов и методом Годри в 1 мм 3 .

Кровь для подсчета берут как из мелких артерий, так и из вены ушной раковины. Произведенное Д. Ф. Даниловым сравнение количественных «показателей крови, взятой из артерии и вены у сельскохозяйственных животных, показало, что между ними нет существенной количественной разницы.

В капле крови форменные элементы тесно прилегают друг к другу, делая не-«возможным их подсчет. Поэтому предва­рительно их необходимо разъединить, уве­личить промежутки между ними настоль­ко, чтобы форменные элементы не налега­ли один на другой. С этой целью исполь­зуются изотопические растворы, в которых эти элементы сохраняют свою форму, из­мерительные трубки, позволяющие отме­ривать небольшое, но точное количество крови и растворителя. Разведенную кровь помещают затем в специальные счетные камеры, в которых и производится под­счет.

Смесители, или меланжеры, представ­ляют собой капиллярные трубочки около 10 см длиной, с шаровидным или груше-дидным расширением, внутри которого на­ходится стеклянный шарик, способствую­щий при встряхивании лучшему смешиванию. На капиллярную часть смесителя нанесены деления, обозначенные цифрами 0,5 и 1,0, а за расширением на трубочке — 101 или 11. Смеситель с меткой 101 предназначается для подсчета эритроцитов, а с меткой 11 — для лейко­цитов. Емкость расширения эритроцитарных смесителей, таким образом, в 10 раз больше, чем у смесителей лейкоцитарных. На смеситель надевают резиновую трубочку с костяным или стеклянным мундштуком.

Читайте так же:
Счетчик калорий для андроид без регистрации

Разведение для подсчета эритроцитов готовят из расчета 1: 100 или 1: 200, а для лейкоцитов — 1: 10 или 1: 20.

При подсчете эритроцитов используют 0,9% раствор поваренной соли, 3% раствор хлористого натрия (Фрейфельд) или жидкость Гайема (сулемы 0,1; хлористого натрия 1,0; сернокислого натрия 5,0 и дистиллированой воды 500,0), а также жидкость ИПК (хлористого натрия 7,0; хлористого калия 0,2; лимоннокислого натрия 5,0; сернокислой магнезии 0,04 и дистиллированной воды 100,0).

Для разведения лейкоцитов употребляют 1 % раствор уксусной кислоты с примесью 3—4 капель 1% раствора генцианвиолета.

Кровь и растворяющую жидкость набирают точно до соответствующей отметки. При наполнении смесителя Необходимо следить за тем, чтобы во время насасывания в кровь или разводящую жидкость не попадали пузырьки воздуха.

После наполнения смесителя концы его зажимают между большим, ауказательным пальцами и плавными движениями кисти руки смешивают жровь с жидкостью. Равномерному перемешиванию способствует перекатывание стеклянной бусинки в расширении смесителя. Жидкость перемеши­вают повторно перед заряжением камеры до получения равномерной гомо­генной мутной взвеси.

Рис. 172. Смесители: 1—для эритроцитов; 2—для лейкоцитов.

Счетная камера представляет собой толстое предметное стекло с укреплен­ными на нем тремя стеклянными пластинками (имеются камеры из цельного стекла, без приклеенных частей). Средняя пластинка разделена желобком на две половины, на каждой из которых выгравировано по сетке.

Средняя пластинка ниже боковых на ОД мм. Если на боковые пла­стинки положить покровное стекло, то между ним и средней пластин­кой образуется щель, равная 0,1 мм. В эту щель и вводят взвесь для под­счета форменных элементов крови.

Чтобы высота камеры не изменялась, покровное стекло или притирается, или же прижимается при помощи специальных клемм. Критерием плотного прилегания покровного стекла к боковым планкам служит появление радуж­ных, так называемых ньютоновских колец.

Кровь, тщательно перемешанную в смесителе, после удаления первых 3—4 капель на фильтровальную бумагу вносят под покровное стекло камеры в виде маленькой капли. В силу ка­пиллярности капля втягивается в просвет между пластинками. Величина капли должна быть такой, чтобы она покрывала всю среднюю пластинку, но не выступала за боковые пластин­ки и на покровное стекло.

Рис. 173. Счетные камеры: А—Горясва; Б—Тома-Цейсса; В—Бюркера.

Заряженную камеру помещают под микроскоп и устанавливают так, чтобы были отчетливо видны деления сетки и форменные элементы, лежащие на ней. После того как форменные элементы осядут и станут отчетливо выде­ляться на фоне сотки, приступают к подсчету.

Сотки в счетных камерах различных авторов неодинаковы как по рисунку, так и по площади.

В 1896 г. Предтеченский предложил оригинальную сетку общей площадью 4 мм 2 . Она разбита на 100 больших квадратов, из которых 25 разделены на 16 маленьких квадратиков. 50 — на прямоугольники и 25 оставлены чистыми. Сторона маленького квадрата равна 1/20 мм, а площадь 1/400 мм 2 .

Преимуществом сетки Предтеченского, занимающей большую площадь (4 мм 2 ), является то, что большие квадраты, разделенные на малые, четко отграничены один от другого, что при работе позволяет сосредоточиться только на одном большом квадрате.

Недостаток этой сетки заключается в том, что лейкоциты приходится подсчитывать как в чистых квадратах, так и в квадратах, разделенных на малые квадратики и прямоугольники.

Принцип построения сетки Предтеченского в 1910 г. был использован Горловым, который увеличил размер ее до 9 мм 2 .

Сетка Горяева состоит из 225 больших квадратов, из которых 25 разделены на 16 малых квадратиков, 100 — на прямоугольники и 100 остаются чистыми.

Каждая из 15 вертикальных и горизонтальных полос сетки Горяев» имеет ширину, равную 1 /20 мм, причем каждая третья полоса разделена, в свою очередь, на четыре узкие полоски шириной 1 /20 мм, пересечением которых образуются маленькие квадратики площадью 1/400 мм 2 . Они соста­вляют 25 групп из 16 квадратиков.

Для подсчета эритроцитов используются большие квадраты, разделен­ные на 16 маленьких. Лейкоциты подсчитывают в больших чистых квадратах, которые полностью помещаются в поле зрения микроскопа.

Рис. 174. Сетка Предтеченского.

Рис. 175. Сетка Горяева.

При обилии лейкоцитов Горяев рекомендует считать их в группах из трех квадратов со стороной в 1 /25 мм и даже по отдельным квадратам; в последнем случае выгоднее пользоваться теми же квадратами, что и для счета эритроцитов.

Положительными сторонами сетки Горяева являются отчетливость рисунка, а отсюда легкость и удобство ориентировки при подсчете, резкая отграниченность больших квадратов, разделенных на 16 маленьких, и большая площадь сетки по сравнению с сеткой Предтеченского.

За рубежом наибольшее распространение имеют сетки Тома, Бюркера и Тюрка. Первые две — оригинальные, а последняя представляет сочетание сеток Тома и Бюркера, наложенных одна на другую.

Сетка Тома имеет вид большого квадрата, разделенного тройными линиями на 16 средних квадратов. Каждый из 16 квадратов, в свою очередь, простыми линиями делится на 16 маленьких квадратиков. Всего таких малень­ких квадратиков в сетке 400. Вся сотка по площади равна 1 мм 2 . Недостатком сетки следует считать то, что квадраты отграничены только тройными линиями, что не дает возможности сосредоточиться на одном большом квадрате, и затруд­няет подсчет. Кроме того, мала площадь этой сетки.

Рис. 176. Сетка Тома.

Рис. 177. Сетка Бюркера.

Сетка Бюркера, площадью 9 мм 2 , в этом отношении стоит не­сколько особняком. Малые квадраты не собраны в группы, а распределены равномерно. Сетка состоит из 144 больших квадратов, по 12 в каждом ряду. Между большими квадратами располагаются 169 маленьких квадратиков, по 13 в каждом ряду. Высота камеры равна 1 /10 мм, площадь большого квадрата 1 /25 мм 2 и малого 1 /100 мм 2 . Сетка Бюркера удобна для подсчета лейкоцитов и менее пригодна для подсчета эритроцитов.

Сетка Тюрка состоит из среднего квадрата—сетки Тома и восьми боковых квадратов — сетки Бюркера.

Читайте так же:
Сброс счетчика тонера brother dcp 7010r через меню

Техника подсчета эритроцитов

Если кровь хорошо размешана в смесителе и правильно заряжена камера, то эритроциты распределяются по сетке равномерно. Если эритроциты лежат неравномерно — в одних квадратах их больше, а в других меньше, то погрешности заключаются или в технике смешивания, или в заряжении камеры. Стекание жидкости на одну сторону возможно при неровной поверх­ности стола, который поэтому рекомендуется установить по ватер­пасу.

При ориентировочном подсчете эритроцитов можно ограничиться опре­делением количества их в пяти больших квадратах; для получения более точных данных необходимо подсчитать 10 и даже больше больших квад­ратов.

Чтобы избежать повторного подсчета форменных элементов, находя­щихся в одной и той же клетке, придерживаются определенной методики подсчета. Его начинают обыкновенно с маленького квадрата, расположенного в левом углу большого квадрата, затем переходят ко второму, третьему и чет­вертому того же ряда. Сосчитав клетки первого ряда, переходят на второй и считают в обратном порядке. Меняя с каждым рядом направление, заканчи­вают подсчет в левом нижнем квадратике первого большого квадрата и пере­ходят на второй большой квадрат.

Количество эритроцитов в большом квадрате определяют двумя методами. Один из них, более точный, предусматривает подсчет всех эритроцитов, лежа­щих внутри квадрата и на его левой и верхней сторонах. Клетки, лежащие на правой и нижней сторонах, относятся к соседним квадратам. В крайних, правых квадратах, как верхних, так и нижних, клетки, лежащие на правой и нижней сторонах, подсчитываются с последними квадратиками.

Этот метод предусматривает подсчет только тех клеток, которые лежат на линиях и прилегают к ним с внутренней стороны, без учета клеток, нахо­дящихся вне квадрата.

Второй метод отличается от первого только тем, что учитываются все клетки, прилегающие снаружи к отграничивающим линиям.

В этом случае подсчет ведется без учета правых и нижних отграничиваю­щих линий.

Зная площадь, на которой произведен подсчет эритроцитов, высоту камеры и степень разведения, можно легко определить количество их в 1 мм 3 .

При вычислении количества эритроцитов в 1 мм 3 используют следующую формулу:

Показатели общего анализа крови

Традиционно при исследовании ОАК часть параметров определяется, а некоторая часть рассчитывается. Рекомендованные для использования в КДЛ методики в 70–80 гг прошлого века были унифицированы для лабораторий республик, входивших в СССР и получили название унифицированных методов исследования.

В последующие десятилетия были ознаменованы широким распространением гематологических анализатором, существенно облегчивших и стандартизировавших работу КДЛ. На сегодняшний день в КДЛ могут использоваться как традиционные методы оценки показателей ОАК так и применение гематологических анализаторов.

ПоказательТрадиционный методГематологический анализатор
Концентрация гемоглобинагемоглобинцианидный методгемихромный метод
Подсчет эритроцитовв камере Горяева световая микроскопиякондуктометрический метод
Подсчет лейкоцитовв камере Горяева световая микроскопиякондуктометрический метод
Подсчет тромбоцитовв камере Горяева световая микроскопия; в мазке крови по Фониокондуктометрический метод
Гематокритгематокритная центрифугарасчёт по формуле с использованием среднего объема клетки (MCV) и числа клеток
Средний объем эритроцитарасчёт по формулеопределение кондуктометрическим методом
Другие эритроцитарные индексырасчёт по формуламрасчет по формулам

Устройство камеры Горяева

Камера Горяева на 2 препарата (слева) и на 4 препарата (справа)

Камера Горяева — представляет собой устройство, предназначенное для подсчета клеток под микроскопом. Наиболее надежными зарекомендовали камеры выточенные из одного куска стекла, «склеенные» камеры, состоящие из нескольких фрагментов, продемонстрировали меньшую надежность при интенсивной эксплуатации.

Сетка камеры Горяева (А — внешний вид, Б — квадраты для подсчета эритроцитов, B — квадраты для подсчета лейкоцитов, Г — квадраты для подсчета тромбоцитов)

Однако, несмотря на доступность камерных методов подсчета количества форменных элементов крови, в настоящее время они постепенно вытесняются методами подсчета клеток на гематологических анализаторах, преимуществом аппаратного подсчёта являются: большая производительность, возможность одновременного подсчета всех форменных элементов крови (эритроцитов, лейкоцитов и тромбоцитов), определения дополнительных показателей, характеризующих форменные элементы (эритроцитарные индексы, группы лейкоцитов, тромбоцитарные индексы и другие).

  • Импедансометрический метод (метод Культера) используется для определения количества клеток и распределение объема лейкоцитов (WBC), эритроцитов (RBC) и тромбоцитов (PLT).
  • Фотометрическое измерение поглощения света используется для определения концентрации гемоглобина (HGB).
  • Оптическое измерение светорассеивания и преломления используется для определения параметров дифференциации пяти популяции лейкоцитов (LYM%, MON%, NEU%, EOS%, BAS%).

Импедансометрический метод (также известный как метод Культера) определяет концентрацию и распределение объема клеток в зависимости от изменения электрического сопротивления, когда частица в проводящей жидкости проходит через маленькую апертуру. Метод также называется «волюметрическим», так как небольшой известный объем крови разбавляется раствором дилюента и проходит через апертуру по установленной норме.

Постоянный ток протекает между двумя электродами с обеих сторон апертуры. Каждая клетка при прохождении через апертуру вызывает изменение импеданса проводящей суспензии клеток крови. Эти изменения регистрируются анализатром как увеличение напряжения между электродами. Количество импульсов определяет количество клеток. Амплитуда импульса пропорциональна объему клетки.

Электронное распознавание позволяет отделить эритроциты (RBC) и тромбоциты (PLT). Литическая реакция лизирует эритроциты для точного измерения лейкоцитов (WBC).

Измерения эритроцитов (RBC) и тромбоцитов (PLT), основанные на методе импеданса, представлены на гистограммах. На данных диаграммах отображено количество клеток (на оси Y) и размер клеток (на оси Х).

Маленькие клетки отображены на левой части гистограммы, большие — на правой. Высота гистограммы заданного размера представляет количество клеток с данным размером. Чем больше высота гистограммы, тем больше клеток.

Экран с результатами гистограммы

Дискриминаторы (предел) отмечены красным цветом. Тромбоциты (RBC) расположены в крайней левой части гистограммы RBC и слева от красного дискриминатора. Гистограмма PLT – это увеличенная область данной области.

Фотометрическое измерение поглощения света

Лизированный раствор пробы можно подвергнуть анализу на гемоглобин (HGB) на основе устойчивого содержания хромогена. Реагент лизирует клетки крови, высвобождающие гемоглобин.

Впоследствии концентрация гемоглобина измеряется фотометрическим путем через камеру WBC. Фактический гемоглобин пробы рассчитывается как разность бланка и измерения крови с/без освещения, чтобы сократить эффект преломления жидкости и светового возмущения.

Фотометрическое измерение поглощения света

Оптическое измерение светорассеивания и преломления

Оптическое измерение светорассеивания и преломления используется для определения параметров дифференциации пяти популяции лейкоцитов (LYM%, MON%, NEU%, EOS%, BAS%). В оптической измерительной головке находится сфокусированный лазер, направляемый на поток лейкоцитов. Изменения интенсивности рассеянного лазерного излучения, проходящего через клетки, определяется объемом и структурой клеток. Изменения фиксируются системой детектора как рост напряжения.

Читайте так же:
Din рейка для счетчика меркурий 201

Количество импульсов пропорционально количеству частиц. Интенсивность каждого импульса пропорциональна объему и гранулярности клеток крови. Дифференциация пяти популяций WBC строится на двухмерной диаграмме объема и распределения гранулярности.

Диаграмма оптической измерительной головки Abacus 5

Клетки большего размера, объема или гранулярности обычно рассеивают больше света. Интенсивность рассеянного света улавливается системой обработки оптических сигналов.

Внешняя структура (и размер клетки) вызывают рассеяние на малые углы. Внутренняя структура вызывает рассеяние на большие углы. Разные углы света улавливаются оптическими датчиками. Таким образом, система получает информацию по двум независимым параметрам об одной клетке, передающей луч света.

Система обработки оптических сигналов

Полученные данные заносятся в плоскую систему координат. Схожие клетки несут схожие характеристики, благодаря чему аналитическое программное обеспечение может дифференцировать клетки и представить диаграммы рассеяния 4-диф. и базофилов.

Диаграмма рассеяния базофилов

Во избежание появления артефактов необходимо проводить регулярное техническое обслуживание, а также требуется постоянно выполнять измерение гематологических контролей для гарантирования эффективного функционирования анализатора. Данная процедура более подробно описана в инструкции пользователя на анализатор Abacus 5.

Анализатор измеряет количество эритроцитов, тромбоцитов и лейкоцитов при помощи различных растворов и методов.

В растворе WBC эритроциты лизируются при помощи специального реагента. Весь процесс проиллюстрирован ниже.

Несмотря на то, что гематалогические анализаторы являются высококачественным прибором в своей категории, а также очень полезным инструментом для проведения автоматического гематологического исследования в лабораториях малого и среднего размера, пользователи должны иметь ввиду, что прибор, тем не менее, имеет некоторые ограничения, которые следует учитывать при эксплуатации. Однако для преодоления данных ограничений в прибор встроен специальный алгоритм флажков, которые указывают на возможные технические ошибки или на наличие незрелых клеток или идиобластов, которые анализатор может неточно распознать. Засчет своей устойчивости к лизирующей процедуре, ядросодержащие эритроциты (NRBC) могут быть приняты за лейкоциты. Это может увеличить общее количество WBC. Схожий размер и структура могут препятствовать подсчету лимфоцитов.

Более того, вследствие их особой реакции на лизирующий эффект, например, нестандартные клетки, бласты, незрелые клетки и активированные лимфоциты могут ошибочно увеличить количество базофилов и/или моноцитов. Активированные лимфоциты (изменчивая форма) и моноциты могут образовать сплошное скопление и в результате количество моноцитов может быть ошибочно завышено, в то время как присутствует активация лимфоцитов (например, в случае вирусных инфекций, таких как мононуклеоз) количество лимфоцитов может быть ошибочно занижено. Пожалуйста, имейте ввиду, что анализатор не выдает интерпретирующих флажков, если параметр измерения вышел за пределы линейности, но рядом с численным значением параметра появляется линейный флажок «*». Если количество определенной популяции клеток ниже или выше верхнего предела диапазона линейности анализатора, прибор может не выдать численный результат. Однако клетки будут отчетливо видны на диаграмме рассеяния и гистограмме, и появится флажок, указывающий на исправление ошибки.

В случае, если количество выше предела диапазона линейности существует высокая вероятность совмещения (т.е. через детектор проходит одновременно несколько клеток). В данном случае для обеспечения точных результатов необходимо выполнить ручное разведение образца физ.раствором и провести повторное измерение. Крайне высокое количество WBC может ошибочно повысить MCV эритроцитов.

Такое высокое количество WBC может повлиять на количество RBC, которое в действительности может быть несколько ниже. Высокое количество клеток или измененные лейкограммы с аномальными клетками характерны для злокачественных гематологических опухолей, и точная интерпретация результатов всегда имеет значение. В общем, необходимо провести визуальный анализ мазка крови аномальных образцов.

Нормальный диапазон значений

Нормальный диапазон значений может варьироваться и зависеть от применяемых технологий. Для установления нормальных значений, которые будут применимы для местного населения, рекомендуется провести ваше собственное исследование.

Анализатор Abacus 5 имеет несколько видов предупреждающих флажков: диапазона линейности, высокого бланка, общего предупреждения, морфологические и интерпретирующие флажки. В нижеприведенных таблицах описаны данные флажки и сообщения, которые их сопровождают. Также в них содержатся руководство к действиям, к которым должен прибегнуть оператор для исправления ошибки.

Счетчик гематологический форменных элементов крови

Количество эритроцитов и лейкоцитов подсчитывается в 1 мм3 крови, а количество кровяных пластинок определяется на тысячу подсчитанных эритроцитов.

Кровь для подсчета может быть взята как из артерии, так и из вены. Сравнение показателей крови из артерий и вен у сельскохозяйственных животных, проведенное Даниловым, показало, что количественной разницы между соответствующими форменными элементами крови артерий и вен не имеется.

Принцип подсчета. Даже в маленькой капле крови форменные элементы тесно прилегают друг к другу, делая невозможным их подсчет. Для подсчета их необходимо разъединить, сделать промежутки между ними настолько большими, чтобы форменные элементы не налегали один на другой. Для этой цели используются изотонические растворы, в которых форменные элементы сохраняют свою форму, и измерительные трубки, позволяющие отмеривать небольшое, но точное количество крови и растворителя. Разведенная кровь помещается дальше в специальные счетные камеры, в которых и производится подсчет форменных элементов.

Смесители, или меланжеры, представляют собой капиллярные трубочки около 10 см длиной, с шаровидным или грушевидным расширением, внутри которого находится стеклянный! шарик, способствующий лучшему смешиванию. На капиллярной части смесителя нанесены деления, обозначенные цифрами 0,5 и 1,0, а за расширением на трубочке—101 или 11. Смеситель с меткой 101 предназначается для подсчета эритроцитов, а с меткой 11—для лейкоцитов. Резервуар эритроцитарных смесителей в 10 раз больше, чем у лейкоцитарных. На смеситель надевается резиновая трубочка с костяным или стеклянным мундштуком. Кровь насасывается ртом. В ‘смесителях Паппенгейма кровь насасывается при помощи поршня, который находится на расширенной части сме сителя.

Разведение для подсчета эритроцитов делают из расчета 1 : 100 или 1 : 200, а для лейкоцитов 1 : 10 или 1 : 20.

Для подсчета эритроцитов используется раствор поваренной соли 0,9%, 3%-ный раствор (Фрейфельд), или жидкость Гайема (сулемы 0,1, хлористого натрия 1,0, сернокислого натрия 5,0 и дистиллированной воды 200,0).

Можно также использовать жидкость ИПК (хлористого натрия 7,0, хлористого калия 0,2, лимоннокислого натрия 5,0, сернокислой магнезии 0,04 и дистиллированной воды 1000,0).

Для подсчета лейкоцитов употребляется 1 %-ный раствор уксусной кислоты с примесью краски (3—4 капли 1%-ного раствора генцианвиолет).

Читайте так же:
Поверка счетчиков компания верле

Для подсчета лейкоцитов у кур используется изотонический раствор, подкрашенный генцианвиолетом.

Кровь и растворяющая жидкость набираются точно до соответствующей метки. При наполнении смесителей необходимо следить, за тем, чтобы во время насасывания крови или разводящей жидкости не попадали пузырьки воздуха.

Когда смеситель наполнен кровью и соответствующей жидкостью, концы его зажимают между большим и указательным пальцами и несколько раз энергично встряхивают, заставляя перекатываться шарик в резервуаре для смешивания крови с жидкостью. Перемешивание жидкости повторяется перед заряжением камеры до получения равномерной мутной жидкости (гомогенной взвеси).

Счетные камеры. Первая счетная камера была сконструирована в 1884 г. Алферовым. Эта камера не получила распространения и в дальнейшем была видоизменена Бюркером.

Счетные камеры представляют собой толстое предметное стекло, на котором укреплены три стеклянные пластинки; на одной из них нанесена сетка. Имеются также камеры из цельного стекла. В камерах типа Бюркера средняя пластинка разделена желобком на две половины, на каждой из которых выгравировано по сетке.

Средняя пластинка, на которой нанесена сетка, ниже боковых пластинок на 0,1 мм. Если на боковые пластинки наложить покровное стекло, то между ними и средней пластинкой образуется щель, равная 0,1 мм. В эту щель и вводится кровь для подсчета форменных элементов.

Чтобы высота камеры не изменялась, покровное стекло или притирается, или же прижимается с помощью специальных клемм. Критерием плотного прилегания покровного стекла служит появление радужных колец (кольца Ньютона).

четные камерыСмесители

1—для эритроцитов; 2—Для лейко-цитов.

Рис. Счетные камеры:

А—камера Горяева; Б—Тома—Цейса

После тщательного перемешивания крови в смесителе и удаления 3—4 капель на фильтровальную бумагу, кровь в виде маленькой капли вносится под покровное стекло. В силу капиллярности капля втягивается в просвет между пластинками. Величина капли должна быть такой, чтобы она покрывала всю среднюю пластинку, на которую нанесена сетка, но не выступала за боковые пластинки и покровное стекло.

Заряженная камера помещается на столик микроскопа и устанавливается так, чтобы деления сетки и форменные элементы, лежащие на ней, были отчетливо видны. После того как форменные элементы осядут и станут отчетливо видны на фоне сетки, приступают к подсчету.

Сетки в счетных камерах различных авторов неодинаковы как по рисунку, так и по площади.

Предтеченский предложил оригинальную сетку, общей площадью 4 мм2 Вся сетка Предтеченского разбита на 100 больших квадратов, из которых 25 разделены на 16 маленьких квадратиков, 50 разбиты на прямоугольники и 25 являются чистыми. Сторона маленького квадрата равна 1/20 мм, а площадь1/400 мм.

Подсчет эритроцитов производится в пяти больших квадратах, разбитых на 16 малых, а лейкоциты подсчитываются на площади всей сетки.

Положительной стороной сетки Предтеченского является то, что большие квадраты, разделенные на малые, четко отграничены один от другого, что позволяет сосредоточиться только на одном большом квадрате. Положительным является и то, что сетка размещена на большой площади (4 мм2).

Рис. Сетка Предтеченского.

Сетка Предтеченского

К недостаткам этой сетки относится то, что приходится подсчитывать лейкоциты на площади всей сетки, как в чистых квадратах, так и в квадратах, разделенных на малые квадраты и прямоугольники, что несколько затрудняет работу. Принцип Предтеченского в построении сетки в 1910 г. был использован Горяевым, который увеличил размер сетки до 9 мм2.

Сетка Горяева состоит из 225 больших квадратов, из которых 25 разделены на 16 малых, 100 на прямоугольники и 100 остаются чистыми.

Каждая из 15 вертикальных и горизонтальных полос сетки Горяева имеет ширину равную 4/20 мм, причем каждая третья полоса, в свою очередь, разделена на четыре узкие полоски шириной в 1/20 пересечением которых образуются маленькие квадратики с площадью в 1/400 мм2. Они группируются по 16, образуя 25 таких групп.

Рис. Сетка Горяева.

 Сетка Горяева

Для подсчета эритроцитов используются большие квадраты, разделенные на 16 маленьких. Эритроциты подсчитываются в пяти таких квадратах, расположенных по диагонали. При анемии количество квадратов при подсчете должно быть увеличено. Чем больше количество больших квадратов, тем ближе к истине будет результат подсчета эритроцитов.

Подсчет лейкоцитов можно проводить в больших чистых квадратах, которые полностью помещаются в поле зрения микроскопа.

При высоком содержании лейкоцитов Горяев рекомендует считать их в группах по три квадрата в 1/25 мм или даже по отдельным квадратам, в последнем случае выгоднее пользоваться теми же квадратами, что и для счета эритроцитов.

Положительной стороной сетки Горяева является отчетливость рисунка, а отсюда легкость и удобство ориентировки при подсчете, резкая отграниченность больших квадратов, разделенных на 16 малых, и большая площадь сетки по сравнению с сеткой Предтеченского. В последнее время камера с сеткой Горяева в Советском Союзе получила широкое распространение.

Из сеток зарубежных авторов наибольшее распространение получили сетки Тома, Бюркера и Тюрка. Первые две являются оригинальными, в то время как последняя представляет сочетание сетки Тома и сетки Бюркера, наложенных одна на другую.

Сетка Тома нанесена в виде большого квадрата, разделенного тройными линиями на 16 средних, квадратов. Каждый из 16, в свою очередь, простыми линиями делится на 16 маленьких квадратиков. Всего таких маленьких квадратиков в сетке 400. Вся сетка по площади равна 1 мм2. Каждая сторона сетки разделена на 20 равных частей. Боковая сторона малого квадрата сетки имеет 1/20*1/20=1/400 мм2. Так как высота в камере равна 1/10 мм, то объем крови в 1 малом квадрате определяется 1/4000 мм3.

 Сетка Тома

Недостатком сетки следует считать то, что квадраты отграничены только тройными линиями, что не дает возможности сосредоточиться на одном большом квадрате, затрудняя тем самым подсчет. Кроме того, площадь этой сетки мала. Сетка Бюркера в этом отношении стоит несколько особняком. Малые квадраты не собраны в группы, а равномерно распределены по всей сетке. Сетка Бюркера равна 9 мм2. Она состоит из 144 больших квадратов по 12 в каждом ряду. Между большими квадратами располагаются малые квадраты по 13 в каждом ряду. Высота камеры 1/10 мм, площадь большого квадрата равна 1/25 мм2 и малого 1/400 мм2. Сетка Бюркера удобна для подсчета лейкоцитов и менее пригодна для подсчета эритроцитов.

голоса
Рейтинг статьи
Ссылка на основную публикацию
Adblock
detector